产品货号：
BTN13-4540
中文名称：
烟草花叶病毒(TMV)RT-PCR试剂盒
英文名称：
Tobacco Mosaic Virus RT-PCR Kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本产品是以RT-PCR技术为基础开发的专门检测烟草花叶病毒的试剂盒。
烟草花叶病毒(Tobacco Mosaic Virus，TMV)为RNA病毒，是烟草花叶病等的病原体，属于Tobamovirus群。烟草花叶病和番茄花叶病早为一般所了解。叶上出现花叶症状，生长陷于不良状态，叶常呈畸形。因此快速灵敏诊断具有重要意义。
保存：-20℃，有效期一年。
注：为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA片段作为阳性对照。如果需要RNA片段作为阳性对照的需要单独定制。
一、样品RNA的制备
二、设置RT-PCR反应(20μL体系)
三、电泳分析
相关搜索：烟草花叶病毒(TMV)RT-PCR试剂盒，Tobacco Mosaic Virus RT-PCR Kit
烟草花叶病毒(Tobacco Mosaic Virus，TMV)为RNA病毒，是烟草花叶病等的病原体，属于Tobamovirus群。烟草花叶病和番茄花叶病早为一般所了解。叶上出现花叶症状，生长陷于不良状态，叶常呈畸形。因此快速灵敏诊断具有重要意义。
- 即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。
- 产品经过精心优化，分析灵敏性能到达100拷贝/反应。
- 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 特异性高，引物是根据烟草花叶病毒RNA高度保守区设计，只能检测烟草花叶病毒，不会跟除此之外的其他生物的RNA发生交叉反应。
- 本产品足够50次20μL体系的RT-PCR反应。
- 本产品只能用于定性实验，不能用于定量实验。
- 本产品只能用于科研。
| 组分 | 规格 |
| 5×双酶一管式RT-PCR Buffer | 200μL |
| MMLV-Taq Mix | 75μL |
| 超纯水 | 1mL |
| 烟草花叶病毒RT-PCR引物混合液 | 100μL |
| 烟草花叶病毒RT-PCR阳性对照(1×107拷贝/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
注：为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA片段作为阳性对照。如果需要RNA片段作为阳性对照的需要单独定制。
一、样品RNA的制备
- 如果有N个样品，必须设置N+2个提取反应，多出的两个中一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL试剂盒提供的RT-PCR阳性对照(1×107拷贝/μL)的10000倍稀释液(1×107拷贝/μL)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。
- 用自选方法纯化上述N+2个样品的RNA。本试剂盒跟市场上大多数样品RNA提取试剂盒兼容，也可以选用本公司的相关的核酸提取试剂盒。
二、设置RT-PCR反应(20μL体系)
- 标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的RNA样品，额外增加的两个管一个用于RT-PCR阳性对照，另一个用于RT-PCR阴性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分：
成分 N+2个
样品管RT-PCR
阴性对照RT-PCR
阳性对照5×双酶一管式RT-PCR Buffer 各4μL 4μL 4μL 烟草花叶病毒RT-PCR引物混合液 各2μL 2μL 2μL 制备的N+2个RNA样品 各12.5μL 不加 不加 超纯水 不加 12.5μL 不加 第1步所得烟草花叶病毒
RT-PCR阳性对照的10000倍稀释液不加 不加 12.5μL MMLV-Taq Mix 1.5μL 1.5μL 1.5μL - 上机进行RT-PCR，RT-PCR反应参数为:
过程 温度 时间 逆转录 42℃ 30分钟 预变性 95℃ 5分钟 PCR反应
(30个循环)95℃ 30秒 55℃ 30秒 72℃ 20秒 延伸 72℃ 7分钟
三、电泳分析
- 取10μL扩增产物进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果，由于扩增产物较短，建议用1.5%～2.0%的琼脂糖凝胶。
- 阳性样品得到预期大小的条带。如果两个阴性对照(样品制备阴性对照或RT-PCR阴性对照)有此扩增产物，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析实验结果。
- 如果所有样品和RT-PCR阳性对照均无此扩增产物，则说明有系统性的问题(试剂，设备，程序，操作等)，需要重复并排查原因。
- 如果没有上述两种情况，则实验有效，可以分析样品的扩增结果。N+2个样品中扩增产物的判断为阳性，无则判定为阴性。
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